近日，武漢友芝友生物制藥有限公司（以下簡(jiǎn)稱“友芝友生物”）分析與質(zhì)控團(tuán)隊(duì)完成了報(bào)告基因法檢測(cè)CD38×CD3雙特異抗體生物學(xué)活性的研究,其研究論文 “Development of a Reporter Gene Method to Measure the Bioactivity of Anti-CD38×CD3 Bispecific Antibody” 發(fā)表于Antibody Therapeutics期刊上。

友芝友生物自主研發(fā)的抗CD38×CD3雙抗體（Y150）是基于YBODY®平臺(tái)技術(shù)開發(fā)的非對(duì)稱性雙特異性抗體。體內(nèi)外研究表明，Y150能激活T細(xì)胞，并有效殺傷表達(dá)CD38的腫瘤細(xì)胞。在雙抗的開發(fā)過程中，建立一種能反映雙抗體作用機(jī)制（MOA）的細(xì)胞生物學(xué)活性評(píng)價(jià)方法非常重要。基于細(xì)胞毒性的檢測(cè)方法如CCK-8，MTS，MTT，LDH等，可以以外周血單核細(xì)胞（PBMC）或T細(xì)胞和細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（CIK）為效應(yīng)細(xì)胞，直接檢測(cè)對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，但由于這些效應(yīng)細(xì)胞難以獲取，且存在較大的個(gè)體差異，因此不適合作為雙抗生物學(xué)活性的評(píng)價(jià)方法。

近年來，基于細(xì)胞水平的報(bào)告基因法廣泛應(yīng)用于檢測(cè)單克隆抗體和雙抗的生物學(xué)活性。檢測(cè)以CD3為靶點(diǎn)的雙抗時(shí)，雙抗一端與腫瘤細(xì)胞相關(guān)的靶點(diǎn)結(jié)合，另一端與工程改造的Jurkat T細(xì)胞上的CD3結(jié)合，激活T細(xì)胞反應(yīng)元件（NFAT-RE）介導(dǎo)表達(dá)的螢光素酶，與外加的螢光素酶底物反應(yīng)，其化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度可定量檢測(cè)雙抗的生物學(xué)活性（圖1）。

圖1 報(bào)告基因法檢測(cè)CD3靶點(diǎn)雙抗生物學(xué)活性

當(dāng)采用報(bào)告基因法檢測(cè)Y150的生物學(xué)活性時(shí)，由于Jurkat T細(xì)胞上同時(shí)表達(dá)CD38和CD3，在沒有腫瘤細(xì)胞存在的條件下，兩個(gè)Jurkat T細(xì)胞會(huì)通過雙抗的連接而自我激活，產(chǎn)生非特異性信號(hào)，從而干擾實(shí)驗(yàn)（圖2，綠色）。利用CRISPR-Cas9技術(shù)敲除Jurkat T細(xì)胞上CD38的表達(dá)，并構(gòu)建穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞株進(jìn)行Y150生物學(xué)活性檢測(cè)（圖2，藍(lán)色），成功消除了非特異性信號(hào)（圖2，棕色）。該方法操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)時(shí)間周期較短，分析方法驗(yàn)證結(jié)果表明該方法在50%-200%范圍內(nèi)具有良好的準(zhǔn)確度、精密度、線性，以及穩(wěn)健性（表1），可用于抗CD38×CD3雙抗體的QC放行檢測(cè)和穩(wěn)定性研究。

圖2 Y150報(bào)告基因法檢測(cè)Y150生物學(xué)活性方法建立

表1 報(bào)告基因法檢測(cè)Y150生物學(xué)活性方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果

在Y150的高溫穩(wěn)定性研究中，報(bào)告基因法、細(xì)胞殺傷法和ELISA法測(cè)定的結(jié)果與CEX-HPLC法測(cè)定的電荷異質(zhì)體之間存在高度相關(guān)性，生物學(xué)活性或相對(duì)結(jié)合活性的降低與酸性電荷異質(zhì)體的增加呈線性相關(guān)，且這三種活性檢測(cè)法測(cè)定的相對(duì)效價(jià)變化趨勢(shì)一致（圖3），進(jìn)一步說明本研究建立的報(bào)告基因檢測(cè)可以反映Y150的作用機(jī)制，能反應(yīng)T-細(xì)胞招募類雙抗體雙靶點(diǎn)的協(xié)同效應(yīng)，用于其生物學(xué)活性的評(píng)估及質(zhì)量控制。

圖3 三種活性檢測(cè)方法相關(guān)性研究結(jié)果

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武漢友芝友生物制藥有限公司是一家專門從事以免疫和靶向療法為核心的生物制藥公司，專注于雙特異性抗體藥物的研發(fā)與產(chǎn)業(yè)化。雙特異性抗體藥物是下一代抗體藥物的核心研方向，在腫瘤、免疫、炎癥、心血管和感染等重大疾病領(lǐng)域具有廣泛的治療前景。友芝友生物制藥基于自主創(chuàng)新的雙抗(YBODY®, CHECKBODY™ 等）、納米抗體、4價(jià)多抗、Fc優(yōu)化等平臺(tái)技術(shù)，已成功開發(fā)出一系列分子和機(jī)制創(chuàng)新、工藝先進(jìn)、質(zhì)量穩(wěn)定的雙抗產(chǎn)品，多個(gè)產(chǎn)品獲得國(guó)家科技部“十二五”、“十三五”重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)支持，已有4個(gè)雙抗一類新藥獲得中國(guó)CDE和美國(guó)FDA臨床試驗(yàn)許可，目前正在進(jìn)行臨床I/II期的評(píng)估和臨床開發(fā)。圍繞核心技術(shù)與產(chǎn)品，公司已申請(qǐng)發(fā)明專利64項(xiàng)，獲得授權(quán)28項(xiàng)（其中國(guó)外授權(quán)專利8項(xiàng)）。友芝友生物以“溯源生命、解密腫瘤”為使命，以創(chuàng)新開發(fā)為核心，建立了完善的國(guó)際化研發(fā)團(tuán)隊(duì)，將持續(xù)擴(kuò)大創(chuàng)新技術(shù)和產(chǎn)品開發(fā)的深度和速度，為保人民的健康提供未滿足的臨床新藥。